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一、酵母培養(yǎng)基種類及用途 

一缺培養(yǎng)基 

     用于單質粒酵母轉化篩選，外源基因在酵母中的表達、異源基因功能互補、酵母單雜交和酵母雙雜交初始質粒轉化。 

二缺培養(yǎng)基 

     用于雙質粒酵母轉化篩選，外源基因在酵母中的表達、異源基因功能互補、酵母單雜交和酵母雙雜交初始質粒轉化免疫共沉淀，Y187、AH109/Y2HGold、NMY51 酵母雜交實驗， 接合型二倍體篩選。 

三缺培養(yǎng)基 

     用于雙質粒酵母轉化篩選和報告基因檢測，外源基因在酵母中的表達、異源基因功能互 補、酵母單雜交和雙雜交報告基因檢測，Y187、AH109/Y2HGold、NMY51 酵母交配實驗后報 告基因分析（His3，Ade2)。 

四缺培養(yǎng)基 

     用于報告基因分析，酵母雙雜交和酵母三雜交報告基因檢測，Y187、AH109/Y2HGold、NMY51 酵母交配實驗后報告基因分析（His3，Ade2)。 

五缺培養(yǎng)基 

     用于報告基因分析和表型分析，酵母三雜交報告基因檢測(His3，Ade2)、酵母營養(yǎng)缺 陷型分離鑒定和表型分析。 

六缺培養(yǎng)基 

     用于報告基因分析、表型分析和藥物毒理分析，酵母三雜交報告基因檢測、酵母營養(yǎng)缺 陷型分離鑒定和表型分析、藥物毒理分析。

Rich medium 

     Rich medium 包括 YPD、YPDA、YPD Plus 系列培養(yǎng)基，也可以稱為完全培養(yǎng)基。 YPD Medium 由精選的蛋白胨、酵母提取物和葡萄糖按適當比例混合組成；YPDA 培養(yǎng)基是 在 YPD 培養(yǎng)基中添加了適量的硫酸腺嘌呤；YPD Plus 相比于 YPDA 的營養(yǎng)更為豐富， 可直接用于釀酒酵母感受態(tài)的復蘇，可以提高轉化效率。YPD Agar、YPDA Agar 分別在 YPD、YPDA 基礎上加入了 Agar，作為固體培養(yǎng)基倒板用。YPD 系列培養(yǎng)基用于釀酒酵母 的常規(guī)培養(yǎng)。

二、酵母培養(yǎng)基的配制 

（1） Rich Liquid Media (Broth) 

     1. 取 50g 的 YPD/YPDA 加 1L 的去離子水中溶解； 

     2. 調節(jié) pH 至 6.5，121℃高壓滅菌 15min； 

     3. 避光、室溫條件下儲存滅菌培養(yǎng)基。 

（2） Rich Plating Media with Agar 

     1. 取 70g 的 YPD Agar/YPDA Agar 加 1L 的去離子水中溶解（瓊脂在高溫滅菌后溶解）； 

     2. 調節(jié) pH 至 6.5，121℃高壓滅菌 15min； 

     3. 冷卻到 50℃把培養(yǎng)基倒入平板中，室溫使其凝固，封口膜封好后倒置保存在 4℃冰箱。

（3） Minimal SD Base 

     1. 在 1L 去離子水中加入 26.7g 的 Minimal SD Base，然后再加入相應量的缺陷氨基酸， 攪拌溶解； 

     2. 調節(jié) pH 至 5.8，121℃高壓滅菌 15min； 

     3. 避光、室溫條件下儲存滅菌培養(yǎng)基。 

（4） Minimal SD Agar Base 

     1. 在 1L 去離子水中加入 46.7g 的 Minimal SD Base，然后再加入相應量的缺陷氨基酸， 攪拌溶解； 

     2. 調節(jié) pH 至 5.8，121℃高壓滅菌 15min； 

     3. 冷卻到 50℃把培養(yǎng)基倒入平板中，室溫使其凝固，封口膜封好后倒置保存在 4℃冰箱。

（5） DO（缺陷氨基酸）類培養(yǎng)基的配制 

     1. 在 1L 去離子水中加入相應量的 DO 培養(yǎng)基，然后再加入 26.7g Minimal SD Base，攪拌 溶解； 

     2. 調節(jié) pH 至 5.8，121℃高壓滅菌 15min； 

     3. 4℃冰箱避光儲存已經(jīng)滅菌的液體培養(yǎng)基。

     或：1. 在 900ml 去離子水中加入相應量的 DO 培養(yǎng)基，然后再加入 6.7g YNB，攪拌溶解； 

     2. 調節(jié) pH 至 5.8，121℃高壓滅菌 15min；

     3. 4℃冰箱避光儲存已經(jīng)滅菌的液體培養(yǎng)基； 

     4. 使用時再加入 100ml 已滅菌的 20%葡萄糖。

（6） SC（缺陷氨基酸+YNB）類培養(yǎng)基的配制

     1. 在 1L 去離子水中加入相應量的 SC 培養(yǎng)基，然后再加入 20g 葡萄糖，攪拌溶解； 

     2. 調節(jié) pH 至 5.8，121℃高壓滅菌 15min； 

     3. 4℃冰箱避光儲存已經(jīng)滅菌的液體培養(yǎng)基；

     或：1. 在 900ml 去離子水中加入相應量的 SC 培養(yǎng)基，攪拌溶解； 

     2. 調節(jié) pH 至 5.8，121℃高壓滅菌 15min； 

     3. 4℃冰箱避光儲存已經(jīng)滅菌的液體培養(yǎng)基； 

     4. 使用時再加入 100ml 已滅菌的 20%葡萄糖。 

（7） SD（缺陷氨基酸+YNB+葡萄糖）類培養(yǎng)基的配制 

     1. 在 1L 去離子水中加入相應量的 SD 培養(yǎng)基，攪拌溶解； 

     2. 調節(jié) pH 至 5.8，121℃高壓滅菌 15min； 

     3. 4℃冰箱避光儲存已經(jīng)滅菌的液體培養(yǎng)基。 

（8） SD with Agar（缺陷氨基酸+YNB+葡糖糖+Agar）類培養(yǎng)基的配制 

     1. 在 1L 去離子水中加入相應量 SD with Agar 培養(yǎng)基，攪拌溶解（瓊脂在高溫滅菌后溶解）；

     2. 調節(jié) pH 至 5.8，121℃高壓滅菌 15min；

     3. 冷卻到 50℃把培養(yǎng)基倒入平板中，室溫使其凝固，封口膜封好后倒置保存在 4℃冰箱。

注意事項： 

     1. 在配制酵母缺陷培養(yǎng)基時，培養(yǎng)基會變色，由淺黃到深褐色不等，對酵母的生長不會產(chǎn) 生嚴重影響。 

     2. DO 類和 SC 類培養(yǎng)基均不含葡萄糖。葡萄糖高溫滅菌會有碳化現(xiàn)象，控制好滅菌溫度和時間，葡萄糖的微量碳化對實驗并無太大影響。如有特殊要求可將 20%葡萄糖單獨滅菌，待使用時再加入。

     3. 缺陷培養(yǎng)基的 PH 值在 5.5-6.5 范圍內都是比較適合酵母生長的，此類試劑粉末的 PH 已 經(jīng)過調試，使用時只需要稍微調整即可。